РЕКОМБІНАНТНИЙ ФЛУОРЕСЦЕНТНИЙ СЕНСОР ПЕРОКСИДУ ГІДРОГЕНУ HyPer, ЗЛИТИЙ ІЗ АДАПТЕРНИМ ПРОТЕЇНОМ Ruk/CIN85: КОНСТРУЮВАННЯ ЕКСПРЕСІЙНОГО ВЕКТОРА ТА ФУНКЦІОНАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА А. В. Базалій, A. В. Воротніков, П. О. Тюрін-Кузьмін, В. А. Ткачук , С.

Деталі: Перегляди: 787

ISSN 2410-7751 (Друкована версія)
ISSN 2410-776X (Електронна версія)

6 2015

Ж-л "Biotechnologia Acta" Т. 8, № 5, 2015;
https://doi.org/10.15407/biotech8.05.019
С. 19-26, бібліогр. 28, англ.
УДК: 577.112:576.385.5

РЕКОМБІНАНТНИЙ ФЛУОРЕСЦЕНТНИЙ СЕНСОР ПЕРОКСИДУ ГІДРОГЕНУ HyPer, ЗЛИТИЙ ІЗ АДАПТЕРНИМ ПРОТЕЇНОМ Ruk/CIN85: КОНСТРУЮВАННЯ ЕКСПРЕСІЙНОГО ВЕКТОРА ТА ФУНКЦІОНАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА

А. В. Базалій¹, A. В. Воротніков ², П. О. Тюрін-Кузьмін ², В. А. Ткачук ², С. В. Комісаренко ¹, Л. Б. Дробот ¹

¹ Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, Київ
²Факультет фундаментальної медицини, Московський державний університет ім. М. В. Ломоносова, РФ

Метою дослідження було конструювання експресійного вектора, що кодує флуоресцентний сенсор пероксиду гідрогену, злитого з адаптерним протеїном Ruk/CIN85, з’ясування його субклітинної локалізації та здатності детектувати Н₂О₂. Встановлено, що в тимчасово трансфікованих клітинах HEK293 та MCF-7 Ruk/CIN85-HyPer концентрується в «дот»-подібних везикулярних структурах різних розмірів, тоді як HyPer розподілений у клітині дифузно. Із використанням прижиттєвої флуоресцентної мікроскопії продемонстровано зростання концентрації Н₂О₂ у репрезентативних везикулярних структурах упродовж зазначеного часу експерименту. Одержана генетична конструкція, що кодує химерний протеїн Ruk/CIN85-HyPer, є новим інструментом для дослідження локалізованого продукування Н₂О₂ у живих клітинах.

Ключові слова: рекомбінантні протеїни, адаптерний протеїн Ruk/CIN85, пероксид гідрогену, сенсор пероксиду гідрогену HyPer, Ruk/CIN85-HyPer.

Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, 2015