ISSN 1995-5537
Ж-л «Біотехнологія» Т. 5, № 5, 2012
С. 16-26, бібл. 74, англ.
УДК 602.641:578.826 602.64 602.9
АДЕНОВІРУСНІ ВЕКТОРИ: ЗРУЧНІ ІНСТРУМЕНТИ
ДЛЯ ДОСТАВЛЕННЯ ГЕНІВ У ПЕРВИННІ КЛІТИНИ ССАВЦІВ
Інститут біології клітини НАН України, Львів
Університет Північної Кароліни в Чепел Гілл, Чепел Гілл, Північна Кароліна, США
Громадський університет Вірджинії, Ричмонд, Вірджинія, США
Культуру тканин широко застосовують як зручний метод сучасної молекулярної біології та для створення лікарських препаратів. В усьому світі використовують численні лінії клітин, отриманих з нормальних і пухлинних тканин. Однак усі існуючі клітинні лінії, у тому числі псевдонормальні, є принаймні мінімально трансформованими, а дослідження, що проводяться з їх використанням, часто не можуть належним чином відтворювати ситуацію, яка існує в природних умовах. Багатьох із цих обмежень можна уникнути за допомогою первинних клітин. На жаль, ці клітини погано піддаються трансфекції. У різних лабораторіях E1/E3-дефіцитні рекомбінантні аденовіруси було охарактеризовано як високоефективні інструменти доставлення генів, які в умовах in vivo дають змогу успішно працювати з різними типами клітин, що важко піддаються трансфекції. Генерування рекомбінантних аденовірусних конструкцій передбачає субклонування вставки до зручної рестрикційної ділянки човникового вектора з наступною гомологічною рекомбінацією отриманого вектора з основною частиною аденовірусного геному. У роботі описано створення за допомогою AdEasy системи понад 80 нових рAдв, зокрема експресійних, люциферазних репортерних систем і векторів, що містять малі інтерферуючі шпилькові РНК. Створені рекомбінантні аденовіруси можуть бути використані в багатьох біологічних системах і в поєднанні з належною процедурою підтримання культури дають можливість досягти 100%-ї ефективності трансдукції клітин, що погано піддаються трансфекції, зокрема первинних кератиноцитів миші, первинних мезенхімних стовбурових клітин кісткового мозку людини та інших типів первинних клітин ссавців.
Ключові слова: аденовірусні вектори, трансдукція, первинні клітини ссавців, мезенхімні стовбурові клітини.
© Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, 2008