СТВОРЕННЯ ТА ХАРАКТЕРИСТИКА ПОЛІКЛОНАЛЬНИХ АНТИТІЛ СПЕЦИФІЧНИХ ДО ЕСТРОГЕНОВОГО РЕЦЕПТОРА ЛЮДИНИ ER А.В. Мазов., І.В. Крупська

Деталі: Перегляди: 92

ISSN 2410-7751 (Print)
ISSN 2410-776X (Online)

cover biotech acta general

Biotechnologia Acta Т. 17, № 1 , 2024
С.62-67, Бібліограф. 15, англ.
УДК: 616.9:579.834:616.15-074:612.017.1.
doi: https://doi.org/10.15407/biotech17.01.062

Повний текст: (PDF, in English)

СТВОРЕННЯ ТА ХАРАКТЕРИСТИКА ПОЛІКЛОНАЛЬНИХ АНТИТІЛ СПЕЦИФІЧНИХ ДО ЕСТРОГЕНОВОГО РЕЦЕПТОРА ЛЮДИНИ ERα

А.В. Мазов., І.В. Крупська

Інститут молекулярної біології і генетики НАН України, Київ

Мета. Отримати та охарактеризувати поліклональні антитіла проти ERα для подальшого з’ясування функціональних зв’язків між ізоформами рецептору естрогену ERα та ізоформами кінази рибосомного протеїну S6 — S6K1.

Матеріали та методи. Клонування кДНК. Експресія рекомбінантних протеїнів у бактеріальній системі. Афінне очищення з бактеріальних лізатів рекомбінантних протеїнів злитих з His-tag за допомогою Ni-NTA хроматографії. Імунізація мишей. Вестерн-блот аналіз та імунопреципітація.

Результати. кДНК, що кодує повнорозмірнуформу hERα клонували у вектор для експресії pET28a в рамці з His-міткою. Рекомбінантний протеїн hERα-His експресували в E. сoli та очищали Ni-NTA хроматографією з клітинного лізату. Очищений hERα-His використовували для імунізації мишей і генерації поліклональних антитіл, специфічність яких аналізували вестерн блот аналізом та імунопреципітацією hERα з лізатів клітин лінії MCF-7.

Висновки. Створені анти-hERα поліклональні антитіла мають конформаційний тип, оскільки специфічно розпізнаються hERα в імунопреципітації, але не в вестерн-блоті. Створено поліклональні
антитіла, придатні для виявлення та аналізу протеїнових комплексів hERα.

Ключові слова: естрогеновий рецептор α людини (ERα), клонування, експресія рекомбінантних протеїнів, антитіла, імунопреципітація.