Biotechnologia Acta Т. 16, №. 3 , 2023
С. 65-69, Бібліогр. 16, англ.
УДК: 664.9; 639.21
DOI: https://doi.org/10.15407/biotech16.03.065

Full text: (PDF, in English)

ВТРАТА ЗНАЧНОЇ КІЛЬКОСТІ РИБОНУКЛЕЇНОВОЇ КИСЛОТИ ПІД ЧАС МЕТОДУ ІЗОЛЯЦІЇ МІНІ-КОЛОНКИ

Sudhir Bhatia

Genekam Biotechnology AG, Дуйсбург, Германія

Мета. Виділення нуклеїнової кислоти є важливим кроком для проведення різних молекулярних аналізів у багатьох лабораторіях по всьому світу. Також поширеною практикою є те, що користувач один раз виділяє рибонуклеїнову кислоту (РНК) із зразків за допомогою міні-колонки та викидає супернатант. Це робить ізольовану РНК обмежувальним фактором у багатьох дослідженнях, оскільки це питання не розглядалося в літературі. Тому ми вирішили визначити, чи є це втратою рибонуклеїнової кислоти під час методу ізоляції на мініколонці.

Метод. Проводили виділення в міні-колонці з різними зразками людських тканин із плаценти та пуповини та подальші виділення супернатантів. Виходи та успішні виділення РНК оцінювали за допомогою спектрометричного приладу та машини ПЛР у реальному часі.

Результати. Було виявлено, що при наступних виділеннях відбувається втрата великої кількості РНК. Кількість, виміряна за допомогою УФ-спектрометра, вказує на те, що іноді 2-й і 3-й виділення містять більше РНК, ніж перше виділення. ПЛР у реальному часі для бета-актину гена домашнього обслуговування показує, що присутність РНК можна побачити до 6 циклів ізоляції з супернатантів.

Висновок. При наступних виділеннях за допомогою методу міні-колонки відбувається втрата РНК, тому можна виділити більше РНК із наступних виділень супернатанту. Користувач повинен виконати багаторазові виділення, щоб отримати більший вихід РНК.

Ключові слова: ииділення мініколонки, РНК; нуклеїнова кислота; полімеразна ланцюгова реакція; ПЛР в реальному часі; віруси; біомаркери; вакцини.

© Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, 2023