Печать

ISSN 2410-776X (электронная версия)
ISSN 2410-7751 (Печатный вариант)

Ж-л "Biotechnologia Acta" Т. 12, № 3, 2019
https://doi.org/10.15407/biotech12.03.075
С. 75-81, бібл. 24, англ
УДК: 579.6:632.4:633.1

МУЛЬТИПЛЕКСНА ТАЧДАУН ПЛР ДЛЯ ШВИДКОГО ОДНОЧАСНОГО ВИЯВЛЕННЯ Rhizoctonia cerealis І Rhizoctonia solani

О. Грыцев1, 2, Ю. Шевченко2, Н. Воробьева1, Л. Скивка1

1Киевский национальный университет имени Тараса Шевченко, УНЦ «Институт биологии и медицины», Украина
2ООО «Сингента», Киев, Украина

Целью работы было разработать быстрый и чувствительный метод для одновременной идентификации R. cerealis и R. solani на протяжении одной реакции. Чистые культуры фитопатогенных грибов культивировали 5 дней на картофельно-глюкозном агаре при 28 °C, после чего отбирали мицелий и выделяли ДНК с помощью коммерческих тест-систем. Молекулярную идентификацию осуществляли с помощью ПЦР с последующим электрофоретическим разделением продуктов амплификации в агарозном геле. Специфические пары праймеров для области с известной последовательностью: RtubR4/RtubF4 для R. cerealis и ITS1/GMRS–3 для R. solani тестировали относительно их специфичности и возможности использования в мультиплексном варианте ПЦР. Для проверки специфичности праймеров проводили анализ ПЦР с другими фитопатогенными грибами и с ДНК, выделенной из здоровых растений пшеницы. Установлено, что выбранные нами пары праймеров продуцировали единственные специфичные фрагменты R. cerealis и R. solani и не проявляли перекрестной специфичности относительно других фитопатогенных грибов. С помощью градиента температур установлены оптимальные значения температур отжига праймеров. Разработанный нами протокол мультиплексной ПЦР пригоден для одновременной идентификации Rhizoctonia cerealis и Rhizoctonia solani на протяжении одной реакции и может быть использован для диагностики полиэтиологических ризоктониозов.

Ключевые слова: фитопатогенные грибы, ризоктонии, мультиплексная ПЦР

© Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, 2019