Biotechnologia Acta

...

  • Увеличить размер шрифта
  • Размер шрифта по умолчанию
  • Уменьшить размер шрифта
Home Архив 2019 № 6 МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗА ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ Pleurotus osreatus Сакович В.В., Стогний Е.H., Жерносеков Д.Д., Ребриев А.В., Королева Д.С.,Марунич Р.Ю., Чернышенко В.А.
Печать PDF

SSN 2410-776X (электронная версия)
SSN 2410-7751 (Печатный вариант)

Ж-л "Biotechnologia Acta" Т. 12, № 6, 2019
https://doi.org/10.15407/biotech12.06.035
С. 35-45, би бл. 27, англ.
УДК: 577.151.6

МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗА ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ Pleurotus osreatus

В. В. Сакович1, Е. H. Стогний 2, Д. Д. Жерносеков 1, А. В. Ребриев 2, Д. С. Королева 2, Р. Ю. Марунич2, В. А. Чернышенко 2

1Полесский государственный университет, Пинск, Беларусь.
2Институт биохимии им. Палладина НАН Украины, Киев, Украина

Цель работы – выявление и изучение физико-химических свойств энзимного препарата, полученного из культуральной жидкости Pleurotus ostreatus.

Фракция, содержащая протеиназу, была получена из культуральной жидкости методом осаждения хлоридом натрия с последующим диализом и концентрированием. Желатиназную и молокосвертывающую активность определяли стандартными методами. Состав протеинового компонента фракции определяли с помощью методов ВЭЖХ, электрофореза по Лэммли и MALDI-TOF анализа. Протеиназную активность изучали энзим-электрофорезом. Для выяснения специфичности действия протеиназы использовали ряд хромогенных субстратов: S2238, S236, S2251, S2765, Leu-pNa, Ala-pNa и S2302. Ингибиторный анализ проводили с использованием ЭДТА, бензамидина, ФМСФ, ПХМБ.

Полученная фракция обладала максимальной протеиназной активностью при 45 °С. При этом максимальная молокосвертывающая активность наблюдалась при 35 °С. Самая высокая молокосвертывающая активность была при рН 5,0 и менее 3,0. Самая высокая протеиназная активность была при рН 6,0. С помощью метода HPLC был найден основной протеиновый компонент и некоторые побочные протеины. Согласно результатам электрофореза, основной протеиновый компонент фракции имел молекулярную массу 45 кДа. Был проведен энзим-форез с использованием фибриногена в качестве стандартного субстрата. Показано, что протеиназная активность фракции присутствовала в зоне, соответствующей 45 кДа. При идентификации продуктов трипсинолиза не обнаружено гомологии с другими известными протеиназами. Показано, что протеиназа гидролизовала пептидные связи, образованные карбоксильной группой аминокислот с гидрофобными боковыми цепями. Фермент ингибировался ЭДТА (ІС50 = 2,5 мМ). Максимальная активность фермента с желатином и Leu-pNa была показана в присутствии 5 мМ хлорида кальция.

В культуральной жидкости Pleurotus ostreatus обнаружена кальций-зависимая металлопротеиназа с молекулярной массой 45 кДа. Фермент не имел гомологии с другими известными протеиназами и гидролизовал пептидные связи, образованные карбоксильными группами аминокислот с гидрофобными боковыми цепями.

Ключевые слова: базидиомицеты, протеолитические ферменты, молокосвертывающая активность, физико-химические свойства.

© Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, 2019


 

Дополнительное меню

Поиск по сайту

Навигация на сайте

Home Архив 2019 № 6 МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗА ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ Pleurotus osreatus Сакович В.В., Стогний Е.H., Жерносеков Д.Д., Ребриев А.В., Королева Д.С.,Марунич Р.Ю., Чернышенко В.А.

Приглашение к сотрудничеству

Господа! Редакция приглашает Вас публиковать свои работы на страницах нашего журнала. © Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины. Все права защищены. Полная или частичная перепечатка материалов журнала только с письменного разрешения редакции. E-mail для справок: biotech@biochem.kiev.ua