ISSN 1995-5537
Научный журнал
"БІОТЕХНОЛОГІЯ"
том 5, № 5, 2012
Ж-л «Біотехнологія» Т. 5, № 5, 2012
С. 16-26, библ. 73, англ.
УДК: 602.641:578.826 602.64 602.9
АДЕНОВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ: УДОБНЫЕ ИНСТРУМЕНТЫ
ДЛЯ ДОСТАВКИ ГЕНОВ В ПЕРВИЧНЫЕ КЛЕТКИ МЛЕКОПИТАЮЩИХ
Институт биологии клетки НАН Украины, Львов
Университет Северной Каролины в Чепел Хилл, Чепел Хилл, Северная Каролина, США
Общественный университет Вирджинии, Ричмонд, Вирджиния, США
Культуру тканей широко применяют в качестве удобного метода современной молекулярной биологии и для создания лекарственных препаратов. Во всем мире используется множество линий клеток, полученных из нормальных и опухолевых тканей. Однако все существующие клеточные линии, в том числе псевдонормальные, являются по крайней мере минимально трансформированными, а исследования с их использованием часто не могут должным образом воспроизводить ситуацию, существующую в естественных условиях. Многих из этих ограничений можно избежать с помощью первичных клеток. К сожалению, эти клетки плохо поддаются трансфекции. В разных лабораториях E1/E3-дефицитные рекомбинантные аденовирусы были охарактеризированы как высокоэффективные инструменты доставки генов, которые в условиях in vivo позволяют успешно работать с различными типами клеток, трудно поддающихся трансфекции. Создание рекомбинантных аденовирусных конструкций включает в себя субклонирование вставки в удобный рестрикционный участок челночного вектора с последующей гомологичной рекомбинацией полученного вектора с остальным аденовирусным геномом. В работе описано создание с помощью AdEasy системы свыше 80 новых рекомбинантных аденовирусов, включая экспресионные векторы, люциферазные репортерные системы и векторы, содержащие малые интерферирующие шпилечные РНК. Созданные рекомбинантные аденовирусы могут быть использованы в различных биологических системах и в сочетании с cooтветствующей процедурой поддержания культур позволяют достичь 100%-й эффективности трансдукции клеток, плохо поддающихся трансфекции, в том числе первичных кератиноцитов мыши, первичных мезенхимных стволовых клеток костного мозга человека и других типов первичных клеток млекопитающих.
Ключевые слова: аденовирусные векторы, трансдукция, первичные клетки млеко пи тающих, мезенхимные стволовые клетки.
© Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, 2008
| < Предыдущая | Следующая > |
|---|
