Biotechnologia Acta

...

  • Увеличить размер шрифта
  • Размер шрифта по умолчанию
  • Уменьшить размер шрифта
Home Архив 2012 № 1 ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ПОЛУЧЕНИЯ ОЧИЩЕННОЙ СУБСТАНЦИИ РЕКОМБИНАНТНОГО АЛЬФА-2B ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА ИЗ ФРАКЦИИ РАСТВОРИМОГО ПРОТЕИНА, ЭКСПРЕССИРУЕМОГО В БАКТЕРИЯХ Escherichia coli Л. Н. Коршун, И. В. Орловская, Л. Н. Мойса, М. И. Вудмаска, А. И. Мельник, А.
Печать PDF


ISSN 1995-5537

Научный журнал

БІОТЕХНОЛОГІЯ
Т. 5, № 1, 2012

Ж-л «Біотехнологія» Т. 5, № 1, 2012
С. 62-69, библ. 23, рус.
УДК: 578.245:57.083.1:579.243:519.24

ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ПОЛУЧЕНИЯ ОЧИЩЕННОЙ СУБСТАНЦИИ РЕКОМБИНАНТНОГО  АЛЬФА-2B ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА ИЗ ФРАКЦИИ РАСТВОРИМОГО ПРОТЕИНА, ЭКСПРЕССИРУЕМОГО В БАКТЕРИЯХ Escherichia coli

Л. Н. Коршун, И. В. Орловская, Л. Н. Мойса, М. И. Вудмаска,
А. И. Мельник, А. Ю. Горлов, С. В. Михалап, Н. Я. Спивак

НПК «Диапроф-Мед», Киев
Институт микробиологии и вирусологии им. Д. К. Заболотного НАН Украины, Киев

Полученные к настоящему времени данные свидетельствуют о важной контрольно-егуляторной функции интерферонов в сохранении гомеостаза, о наличии прямых и обратных связей между интерферонами, иммунной и нейроэндокринной системами, которые в совокупности составляют основу биологической защиты организма.

Применение интерферона в терапии ряда заболеваний базируется главным образом на его антивирусных, антипролиферативных, иммуномодулирующих и радиопротекторных свойствах. Однако широкое внедрение этих препаратов, получаемых из лейкоцитов периферической крови доноров, ограничивается их высокой стоимостью и дефицитом биологически безопасного сырья. Важным достижением в области изучения биологических свойств лейкоцитарного интерферона человека было определение его аминокислотной последовательности, что с помощью ДНК-ехнологий позволило получить первые искуcственные аналоги, пригодные для применения в клинической практике.

В современном биотехнологическом производстве рекомбинантных протеинов используют клетки различных микроорганизмов. Цель работы заключалась в подборе оптимальных условий индукции биосинтеза растворимой формы альфа-2b интерферона человека в клетках бактерий Escherichia coli и разработке эффективной технологии получения очищенной субстанции, пригодной для изготовления препаратов интерферона терапевтического назначения.

В ходе исследований применяли плазмидный вектор рЕТ32а, содержащий вставку гена, продуктом экспрессии которого в клетках E. coli штамма Origami(DE3) был рекомбинантный аналог природного лейкоцитарного альфа-2b интерферона человека. Подобраны оптимальные параметры культивирования продуцента для максимального выхода растворимой формы заданного протеина.

Разработана трехступенчатая схема хроматографической очистки альфа-2b интерферона, включающая катионо- и анионообменную хроматографию с применением сорбентов: СМ-toyopearl и DEAE-toyopearl, а также гель-фильтрацию. При этом степень очистки полученной субстанции альфа-2b интерферона составляла 96–98%, а выход протеина — 2,31 мг в расчете на 1 л питательной среды.

Ключевые слова: рекомбинантный альфа-2b интерферон человека, бактерии Escherichia coli, культивирование продуцентов, хроматографическая очистка протеинов.

© Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, 2008

 

Дополнительное меню

Поиск по сайту

Навигация на сайте

Home Архив 2012 № 1 ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ПОЛУЧЕНИЯ ОЧИЩЕННОЙ СУБСТАНЦИИ РЕКОМБИНАНТНОГО АЛЬФА-2B ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА ИЗ ФРАКЦИИ РАСТВОРИМОГО ПРОТЕИНА, ЭКСПРЕССИРУЕМОГО В БАКТЕРИЯХ Escherichia coli Л. Н. Коршун, И. В. Орловская, Л. Н. Мойса, М. И. Вудмаска, А. И. Мельник, А.

Приглашение к сотрудничеству

Господа! Редакция приглашает Вас публиковать свои работы на страницах нашего журнала. © Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины. Все права защищены. Полная или частичная перепечатка материалов журнала только с письменного разрешения редакции. E-mail для справок: biotech@biochem.kiev.ua