Biotechnologia Acta

...

  • Увеличить размер шрифта
  • Размер шрифта по умолчанию
  • Уменьшить размер шрифта
Home Архив 2020 № 4 НЕКОЕНЗИМНЫЕ СВОЙСТВА ТИАМИНА: ОЦЕНКА АФФИННОГО СВЯЗЫВАНИЯ С ИЗОФОРМАМИ МАЛАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ О. Меженская, А. Ребриев, А. Кобзар, Н. Златоуст, А. Вовк, Ю. Пархоменко
Печать PDF

ISSN 2410-7751 (Печатный вариант)
ISSN 2410-776X (электронная версия)

Ж-л "Biotechnologia Acta" Т. 13, № 4, 2020
С. 26-38 , библиогр. 26, англ.
УДК:  577.151.6:577.161.11
https://doi.org/10.15407/biotech13.04.026

НЕКОЕНЗИМНЫЕ СВОЙСТВА ТИАМИНА: ОЦЕНКА АФФИННОГО СВЯЗЫВАНИЯ С ИЗОФОРМАМИ МАЛАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ

О. Меженская 1, А. Ребриев 1, А. Кобзар 2, Н. Златоуст 1, А. Вовк 2, Ю. Пархоменко 1

1 Институт биохимии им. А.В. Палладина Национальной академии наук Украины, Киев
2 Институт биоорганической химии и нефтехимии им. В. П. Кухаря Национальной академии наук Украины, Киев

Целью работы была оценка аффинности связывания тиамина с изоформами малатдегидрогеназы. Исследование включало использование методов аффинной хроматографии, SDS PAGE электрофореза и MALDI-TOF масс-спектроскопии, а также молекулярного моделирования in silico. Аффинный сорбент (T-АС) содержал C2-конъюгированный тиаминовый фрагмент в качестве якоря, который был связан с активированной сефарозой 4B через спейсер, состоящий из гидразида N-4-азобензоилкапроновой кислоты. Для экспериментального исследования был выбран коммерческий препарат MDH из сердца свиньи. Анализ содержания протеина во фракциях с использованием метода Брэдфорда показал, что три основных отдельных пика протеина с малатдегидрогеназной активностью были получены после элюирования раствором тиамина. Результаты одномерного электрофореза исходного препарата MDH и объединенной фракции протеинов, которые были сняты из аффинного сорбента раствором тиамина, показали, что почти все фракции протеина, обнаруженные в коммерческом препарате MDH, также присутствуют в элюатах с T- АС. Четыре изоформы MDH были связаны с аффинным сорбентом, а именно цитоплазматическая малатдегидрогеназа (MDH1), митохондриальная малатдегидрогеназа (MDH2) и ее изформа и малатдегидрогеназа 1B (MDH1B). Согласно результатам молекулярного докинга наиболее предпочтительным как для мономерной, так и гомодимерной MDH1 и MDH2 может быть положение лиганда в сайте связывания NAD (NADH). В случае гомодимера дополнительный сайт связывания может быть расположен между двумя субъединицами. Наши результаты подтверждают ранее полученные данные и расширяют представление о способности изоформ MDH взаимодействовать с молекулой тиамина in vivo. Эти данные также могут быть полезны для идентификации тиаминсвязывающего протеина (ThBP), который был ранее выделен из мозга крысы, принимая во внимание возможную частичную гомологию этого протеина с протеинами, которые проявляют активность MDH.

Ключевые слова: тиамин, аффинна хроматография, малатдегидрогеназа, аффинность протеинов к тиамину, молекулярный докинг, тиаминсвязывающий протеин.

© Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, 2020


 

Дополнительное меню

Поиск по сайту

Навигация на сайте

Home Архив 2020 № 4 НЕКОЕНЗИМНЫЕ СВОЙСТВА ТИАМИНА: ОЦЕНКА АФФИННОГО СВЯЗЫВАНИЯ С ИЗОФОРМАМИ МАЛАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ О. Меженская, А. Ребриев, А. Кобзар, Н. Златоуст, А. Вовк, Ю. Пархоменко

Приглашение к сотрудничеству

Господа! Редакция приглашает Вас публиковать свои работы на страницах нашего журнала. © Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины. Все права защищены. Полная или частичная перепечатка материалов журнала только с письменного разрешения редакции. E-mail для справок: biotech@biochem.kiev.ua


недавно добавлены